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供應(yīng)雞吡啶酚(PYD)ELISA Kit
本試劑盒僅供體外研究使用!
預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測(cè)定雞尿液或其它相關(guān)生物液體中吡啶酚(PYD)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗PYD 抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗PYD 抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過(guò)徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中
的PYD 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板:一塊(96孔)
2. 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品):2瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml,蓋好后靜置10分鐘以上,然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解,其濃度為800 nmol/L,將其稀釋為200 nmol/L后,再做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別稀釋成200 nmol/L,100 nmol/L,
50 nmol/L,25 nmol/L,12.5 nmol/L,6.25 nmol/L,3.12 nmol/L,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 nmol/L,臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制100 nmol/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.5ml(不要少于0.5ml)200 nmol/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf 管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。
3. 樣品稀釋液:1×20ml。
4. 檢測(cè)稀釋液A:1×10ml。
5. 檢測(cè)稀釋液B:1×10ml。
6. 檢測(cè)溶液A:1×120μl(1:100)臨用前以檢測(cè)稀釋液A 1:100稀釋?zhuān)♂屒案鶕?jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(100μl/孔),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl 檢測(cè)溶液A加990μl 檢測(cè)稀釋液A的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
7. 檢測(cè)溶液B:1×120μl/瓶(1:100)臨用前以檢測(cè)稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測(cè)溶液A。
8. 底物溶液:1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液:1×30ml/瓶,使用時(shí)每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液:1×10ml/瓶(2N H2SO4)。
11. 覆膜:5張
12. 使用說(shuō)明書(shū):1份
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