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供應(yīng)人波形蛋白(VIM)ELISA Kit
本試劑盒僅供體外研究使用!
預(yù)期應(yīng)用
ELISA法定量測定人血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中VIM含量。
實(shí)驗(yàn)原理
用純化的抗體包被微孔板，制成固相載體，往包被抗VIM 抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗VIM 抗體、HRP標(biāo)記的親和素，經(jīng)過徹底洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中
的VIM 呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。
試劑盒組成及試劑配制
1. 酶聯(lián)板：一塊（96孔）
2. 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動以助溶解，其濃度為40 ng/ml，將其稀釋為20 ng/ml 后，再做系列倍比稀釋(注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋)，分別稀釋成20 ng/ml，10 ng/ml，5ng/ml，
2.5 ng/ml，1.25 ng/ml，0.625 ng/ml，0.312 ng/ml，樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度0 ng/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。如配制10 ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)品：取0.5ml (不要少于0.5ml ) 20 ng/ml的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3. 樣品稀釋液：1×20ml。
4. 檢測稀釋液A：1×10ml。
5. 檢測稀釋液B：1×10ml。
6. 檢測溶液A：1×120μl（1:100）臨用前以檢測稀釋液A 1:100稀釋，稀釋前根據(jù)預(yù)先計算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（100μl/孔），實(shí)際配制時應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl 檢測溶液A加990μl 檢測稀釋液A的比例配制，輕輕混勻，在使用前一小時內(nèi)配制。
7. 檢測溶液B：1×120μl/瓶（1:100）臨用前以檢測稀釋液B 1:100稀釋。稀釋方法同檢測溶液A。
8. 底物溶液：1×10ml/瓶。
9. 濃洗滌液：1×30ml/瓶，使用時每瓶用蒸餾水稀釋25倍。
10. 終止液：1×10ml/瓶（2N H2SO4）。
11. 覆膜：5張
12. 使用說明書：1份
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